Respuesta inmune y terapia gó©nica con vectores virales adenoasociados / Immune response and gene therapy with adenoassociated viral vectors

En los ó;ºltimos aó;±os la terapia gó;©nica se ha posicionado como una opció;n real y segura en el desarrollo de alternativas terapó;©uticas para la cura y la prevenció;n de diferentes enfermedades. Consiste en la inserció;n de material genó;©tico en un tejido o có;©lula defectuosa, mediante el uso de un vector. Existen varias consideraciones para seleccionar el vector más apropiado, incluyendo el potencial de unió;n y entrada a la có;©lula diana, la capacidad de transferencia del material genó;©tico al nó;ºcleo, la habilidad de expresió;n del inserto y la ausencia de toxicidad. En el panorama actual, los vectores virales más utilizados son los derivados de los virus adenoasociados (AAV). Características como su bioseguridad, baja toxicidad y tropismo selectivo, han posibilitado su evaluació;n como opció;n terapó;©utica en un amplio nó;ºmero de enfermedades monogó;©nicas o complejas. A pesar de sus ventajas, los vectores AAV presentan inconvenientes, siendo el más importante la respuesta inmune del paciente al vector, especialmente la respuesta mediada por anticuerpos neutralizantes (NAb). Los NAb disminuyen la transducció;n del vector e impiden la expresió;n del gen que transporta, limitando su aplicació;n clínica. Por lo tanto, identificar y cuantificar la presencia y actividad de los NAbs, es el primer paso en cualquier protocolo de terapia gó;©nica con vectores AAV. La presencia de NAb depende principalmente de la exposició;n al virus en la naturaleza y varía drásticamente segó;ºn edad, localizació;n geográfica y estado de salud de la persona evaluada.

In recent years, gene therapy has been positioned as a real and safe option in the development of therapeutic alternatives for the cure and prevention of different diseases. It consists in the insertion of genetic material in a defective tissue or cell, through the use of a vector. There are several considerations for selecting the most appropriate vector, including the potential for binding and entry to the target cell, the ability of the genetic material to transfer to the nucleus, the ability to express the insert, and the absence of toxicity. In the current scenario, the most commonly used viral vectors are those derived from adeno-associated viruses (AAV). Characteristics such as biosafety, low toxicity and selective tropism have enabled its evaluation as a therapeutic option in many monogenic or complex diseases. Despite their advantages, AAV vectors have drawbacks, the most important being the patient’s immune response to the vector, especially the response mediated by neutralizing antibodies (NAb). NAbs decrease the transduction of the vector and prevent the expression of the gene it transports, limiting its clinical application. Therefore, identifying and quantifying the presence and activity of NAbs is the first step in any gene therapy protocol with AAV vectors. The presence of NAbs depends mainly on exposure to the virus in nature and varies drastically according to age, geographic location and health status of the person evaluated.

Variables pre-analíticas que afectan las concentraciones de homocisteína: aplicación para biobancos con fines de investigación / Pre-analytical variables that affect homocysteine concentrations: applications for research biobanks

Objetivo: El presente estudio evaluó el impacto de variables pre-analíticas sobre las concentraciones séricas de la homocisteína y su posible aplicación en biobancos con fines de investigación. Metodología: En diez adultos voluntarios auto declarados sanos, se tomaron muestras de sangre periférica bajo diferentes condiciones de ayuno, posición de toma de la muestra (supino versus sentada) y diferentes intervalos de tiempo entre la toma y la separación definitiva de componentes. Todas las alícuotas fueron almacenadas a - 800C en el biobanco hasta el momento de ser procesadas. La medición de homocisteína se hizo por duplicado en Immulite® 2000. Se realizó análisis de concordancia por medio de coeficiente de Lin (σ) y MANOVA. Resultados: La medición de homocisteína es altamente reproducible (σ=0.908, IC95% 0.861 a 0.955), sin que el ayuno o el tiempo de centrifugación de la muestra afecte su concentración. Sin embargo, la posición al momento de la toma de muestra, implica una reducción media de 14.2% (IC95% 8.4% a 20.0%) en la concentración de homocisteína en posición decúbito supino versus la toma en posición sentado. Conclusión: La homocisteína es un biomarcador estable, sin que su valor se vea alterado por variables pre-analíticas como los tiempos entre toma de muestra, centrifugación y separación de componentes (almacenamiento temporal a 4°C hasta 24 horas). Sin embargo, la postura del participante al momento de la toma de muestra produce una variabilidad significativa. Estos hallazgos reiteran el papel de un biobanco en la estandarización de los procesos de toma, manipulación, almacenamiento y gestión con criterios de excelencia. [Serrano NC, Páez MC, Bautista PK, Díaz-Martínez LA, Guío E. Variables pre-analíticas que afectan las concentraciones de homocisteína: Aplicación para biobancos con fines de investigación.

Objective: This study evaluated the impact of pre-analytical variables on serum concentrations of homocysteine, and its possible applications in biobanks for research purposes. Methods: Peripheral blood samples from ten self-reported healthy volunteers were obtained under different conditions of fasting and body position (supine and sitting). Blood samples were temporarily stored for different time intervals between its collection and its centrifugation. All aliquots were stored at -80ºC in our biobank until processing. Duplicate Homocysteine measurements were performed in Immulite® 2000. A concordance analysis was performed using Lin coefficient (σ) and MANOVA. Results: The measurement of homocysteine is highly reproducible (σ = 0.908, 95% CI 0861-0955) and fasting or time before centrifugation does not affect its concentration. However, we found an average reduction of 14.2% (95% CI 8.4% to 20.0%) for the Hcy levels in samples obtained when the subjects were in supine position as compared to the levels in sitting position. Conclusion: Homocysteine levels are stable, when the blood samples remain without centrifugation, up to 24 hours at 4ºC. However, body position of the participant at the time of sampling can affect Hcy levels. These findings highlight the role of biobanks in standardizing, handling and storing biological samples with excellence criteria. [Serrano NC, Páez MC, Bautista PK, Díaz-Martínez LA, Guío E. Pre-analytical variables that affect homocysteine concentrations: Applications for research biobanks.

Preeclampsia y riesgo cardiovascular: estudio de seguimiento en la población de GenPE en Colombia / Pre-eclampsia and cardiovascular risk: a follow-up study of the GenPE population in Colombia

Introducción: las mujeres con antecedente de preeclampsia (PE) tienen mayor riesgo de desarrollar enfermedad cardiovascular. El estudio GenPE ha captado gestantes con y sin PE en Colombia durante diez años, haciendo posible hoy evaluar desenlaces cardiovasculares en este grupo. Objetivo: determinar la presencia de enfermedad cardiovascular en mujeres jóvenes expuestas o no a preeclampsia, captadas por el estudio GenPE en Bucaramanga, Colombia. Materiales y métodos: estudio de cohorte que incluyó 106 pacientes –a partir de la cohorte original, 666 pacientes (2005-2010)–, menores de 26 años, primigestantes, sin antecedentes de enfermedades crónicas. Se realizó examen físico y venopunción para glucemia, perfil lipídico, ácido úrico y apolipoproteínas A-I y B. Se evaluó la presencia de hipertensión arterial (HA), obesidad, diabetes mellitus tipo 2 y síndrome metabólico. Se establecieron diferencias entre las mujeres expuestas y no expuestas a preeclampsia y el cambio entre el ingreso a GenPE y el primer seguimiento mediante test Wilcoxon o chi cuadrado y riesgo relativo con IC 95%. Resultados: se encontró asociación entre la exposición a PE con cifras mayores de presión arterial diastólica (p = 0,003) e hipercolesterolemia (p = 0,040). En toda la población existen niveles subóptimos de colesterol HDL y Apo A-I. Al primer seguimiento no se evidencia asociación con desenlaces fuertes, tales como: hipertensión arterial, obesidad, diabetes mellitus tipo 2, síndrome metabólico. Conclusión: en una muestra de mujeres colombianas jóvenes expuestas y no expuestas a PE, en un primer seguimiento, en los primeros dos años posteriores al parto, se evidencian cambios en la presión arterial diastólica (PAD), y biomarcadores asociados a riesgo cardiovascular.

Introduction: Females having a background of pre-eclampsia (PE) are at greater risk of developing cardiovascular disease. The GenPE study has captured pregnant females with and without PE in Colombia during the last 10 years, making it possible today to evaluate cardiovascular outcomes in this group. Objective: Determining the presence of cardiovascular disease in young females who were and were not exposed to preclampsia and who were recruited by the GenPE study carried out in Bucaramanga, Colombia. Materials and methods: This was a cohort study which included 106 primiparous patients aged less than 26 years old having no background of chronic disease taken from an original cohort of 666 patients (2005-2010). They were physically examined and venopuncture was made for glycemia, lipid profile, uric acid and apolypoprotein A-I and B. The presence of hypertension, obesity, type 2 diabetes mellitus and metabolic syndrome were evaluated. Differences were established by Wilcoxon or Chisquared tests (relative risk and 95% CI) between females who had been exposed to PE and those who had not been so and the change between entering the GenPE study and the first follow-up. Results: An association was found between exposure to PE and having higher diastolic pressure figures (p = 0.003) and hypercholesterolemia (p = 0.040). Sub-optimal HDL cholesterol and apo A-I levels were found in the whole population. No association with strong outcomes was found during the first follow-up, such as hypertension, obesity, type 2 diabetes mellitus or metabolic syndrome. Conclusion: Changes in peripheral arterial disease (PAD) and cardiovascular risk-associated biomarkers became evident in a sample of young colombian females who developed PE during the first followup within 2 years after delivery.